支原体检测试剂盒的作用及实验过程

 　　支原体检测试剂盒是用于在培养细胞中原位染色检测支原体或其它原核生物的试剂盒。主要用于检测培养细胞中是否存在支原体污染。

　　培养细胞中的细菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光学显微镜下可见，但支原体污染在光学显微镜下不可见，必须通过特定的检测方法进行检测。检测支原体污染的方法有很多种，包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、RT-PCR检测以及DNA荧光染色检测。上述检测方法中，除DNA荧光染色检测外操作步骤相对比较烦琐并且所需时间较长。本支原体检测试剂盒是通过Hoechst染色来检测支原体的。支原体检测试剂盒的荧光染色可快速、有效、高灵敏度地检测支原体污染。

　　细胞培养体系被支原体污染之后，支原体*的代谢酶类会产生支原体*的代谢产物，而真核细胞或细菌不会产生这种代谢产物，因而可以通过检测这种代谢产物而检测支原体的存在。如果样品中含有支原体特异的代谢产物，反应系统(包括样品、反应孔与反应缓冲液)会产生蓝绿色，代谢产物浓度越高，颜色越深。

　　支原体检测试剂盒储存条件

　　该试剂盒已灭菌封装。4-25℃储存，可达12个月。

　　支原体检测试剂盒的实验方法

　　1. 所有操作均在室温(22-28℃)下进行。

　　2. 打开检测板，在孔中加入40 μL Reaction Buffe A。

　　3. *个孔加入10 μL阴性对照，其他孔加入10 μL待测样品或阳性对照。

　　4. 轻轻混匀，室温孵育5分钟。

　　5. 所有孔中均加入40 μL Reaction Buffe B。

　　6. 轻轻混匀，室温孵育4分钟。

　　7. 每孔加入5μL Stop Solution，轻轻混匀。

　　8. 可在30分钟内观察样品颜色的变化或进行拍照保存：

　　a) 如果待测样品的颜色深于阴性对照，表明样品被支原体污染。

　　b) 如果待测样品的颜色与阴性对照相同，表明样品没有支原体污染。

　　如果发现有支原体污染，建议更换无污染的细胞进行培养。如果有必要去除支原体，可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原体污染。支原体检测试剂盒如用于六孔板样品检测，至少可以检测100个样品。