LONZA支原体检测试剂盒的操作步骤说明

 　　LONZA支原体检测试剂盒操作步骤：

　　贴壁细胞：

　　1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。同时，接种正常

　　无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。

　　2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，

　　3.吸去固定液，晾干。

　　4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部

　　被检细胞)，37℃避光放置15-20min或室温静置20～30min。

　　5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加

　　入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。

　　6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状

　　荧光小点。

　　悬浮细胞：

　　1.收集需检测的细胞，1500rpm，5min。

　　2.将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。

　　3.吸去固定液，晾干。

　　4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部

　　被检细胞)，37℃避光放置15～20min或室温静置20～30min。

　　5.吸去Hoechst 33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴

　　封固液，并以盖玻片覆盖。

　　6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状

　　荧光小点。

　　结果判断(参考)：

　　阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。

　　阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。