RetroNectin 逆转录技术和T细胞扩增方法

RetroNectin逆转录技术操作流程

RetroNectin技术可以显著提高逆转录病毒的转染效率，这一发现克服了向造血干细胞中导入基因的困难。现在，RetroNectin技术已成为使用逆转录病毒进行转染操作的常规选择，其操作流程大致如下：

1. 注射用水或灭菌蒸馏水充分溶解RetroNectin，调节浓度至1mg/ml。

2. 0.22 μm滤膜过滤RetroNectin溶液，分装后-20 ℃保存。

3. 用缓冲液将RetroNectin溶液稀释至20～100 μg/ml。

4. 将RetroNectin稀释液加入24孔板，每孔0.5 ml (建议用PBS缓冲液稀释RetroNectin后包被Non-Tissue Cluture Treated plate。

5. 室温放置4小时或4 ℃，避光，过夜。

6. 吸出RetroNectin溶液，每孔加入PBS终止液0.5 ml。

7. 室温放置30分钟。

8. 加入适量PBS清洗孔板。

9. 吸出清洗液，得到RetroNectin包被的孔板 (如果暂不使用，可以在孔中加入适量PBS，用胶膜将平板盖密封，避免RetroNectin干燥，可于4 ℃保存4周。使用前将PBS吸出) 。

10. 逆转录病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。

11. 将病毒液加入包被后的24孔板，每孔300 μl。

12. 32 ℃放置4小时。

13. 吸出病毒保存液。

14. 每孔加入待转染的细胞悬液400 μl (通常细胞浓度为1 × 105/ml) 。

RetroNectin刺激T细胞扩增方法

T-cell expansion protocol using RetroNectin reagent, GT-T551 T-cell medium, CultiLife bags, and anti-CD3 mAb.

1.  RetroNectin和CD3单克隆抗体包被培养袋。

2.  同时，来自PBMC的T细胞用GT-T551培养基+IL-2+血浆培养。

3.  第4天，T细胞转移到培养袋，继续用GT-T551培养基+IL-2+血浆培养。

4.  第7天，添加更多GT-T551培养基+IL-2。

5.  第10天，分装两个培养袋，添加更多GT-T551培养基+IL-2。

RetroNectin® 重组人纤维蛋白片段

RetroNectin^®是在大肠杆菌中产生的重组人纤维蛋白片段FN CH-296。 当包被在培养瓶和培养板表面时，RetroNectin^®能显著增强逆转录病毒介导的基因转移到哺乳动物细胞中。RetroNectin^®重组人纤维蛋白片段和CD3单抗共同作用可刺激T细胞的增殖和分化。

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