01. 贴壁VS悬浮转染区别
贴壁转染与悬浮转染在操作流程、时间成本、转染效率、操作难度、细胞用量、观察难度和适用场景上有所区别。贴壁转染通常需要较长时间等待细胞贴壁,但操作简单,转染效率高,适合常规转染实验和需要高效率转染的场景。悬浮转染则时间成本较短,细胞用量更灵活,适合快速筛选实验和大规模转染。
02. 细胞培养与准备
以LX2细胞为例,这是一种人类肝星状细胞的永生化细胞系,广泛用于肝脏研究。LX2细胞贴壁生长,呈上皮细胞样。培养基成分为DMEM培养基,含10%胎牛血清和1%双抗。转染前,确保细胞处于良好生长状态,活率需超过90%。调整细胞转染密度时,避免反复离心,以免影响细胞活力和转染效率。
03. 转染操作

3.1 细胞准备
3.2 配置ProteanFect转染体系
3.3 转染
将上述ProteanFect转染液加入细胞。
37℃培养箱孵育60分钟。
加入200 μL完·全培养基继续培养,24小时后检测EGFP mRNA表达,48小时后检测GFP pDNA表达。
04. 转染检测
使用ProteanFect试剂盒转染LX2细胞后,可以通过荧光显微镜观察EGFP的表达,评估转染效率和细胞形态。细胞活率可通过镜下观察、台盼蓝染色或流式细胞术等方法检测。