转染试剂盒的标准操作步骤

 　　转染试剂盒可用于转染的细胞包括各种细胞株和原代细胞，例如成纤维细胞，成肌细胞，间充质干细胞，上皮细胞等等。转染试剂盒都经无菌处理，并通过严格质量检验，可以直接使用。转染试剂盒可在室温(15～25℃)保存三个月，4℃保存一年，-20℃保存一年以上。

　　转染试剂盒的标准操作步骤：

　　1. 使用前预热试剂至常温。

　　2. 转染前一天，接种适量细胞悬液至100-mm培养皿、60-mm培养皿或6孔板中，放置到潮湿37°C 5% CO2 培养箱培养过夜。

　　3. 次日，吸去细胞培养液，加入新鲜培养液。

　　4. 取两根无菌1.5ml eppendorf管，分别记为A、B。按下表，根据培养皿不同而加入不同体积的试剂：

　　5. 用移液管混匀B管中溶液并将B管中溶液轻轻逐滴加入到A管中。用气泡法混匀转染混合物，这一步尽量在2分钟内完成，室温孵育30分钟。

　　6. 将混合物逐滴加入到细胞中，轻轻摇晃培养皿使混合物均匀分布在细胞表面。

　　7. 放置到潮湿37°C、5%CO2培养箱中培养过夜。

　　8. 次日早上用新鲜培养基更换细胞培养液，于37℃ 5%CO2培养箱中继续培养24-48h。

　　9. 检验转染效率(如荧光观察，蛋白质印迹等)。

　　转染试剂盒使用注意事项：

　　转染前以细胞融合度不超过80%为宜，接种密度因所采用的细胞系和细胞的倍增时间而有所不同。

　　高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280大于1.8，并且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。

　　转染时，B管中溶液轻轻逐滴加入到A管中，请勿混乱顺序。

　　溶液的pH值关系到转染效率，尽量避免把转染试剂盒的溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。

　　转染时由于质粒不同、细胞不同，*的质粒用量需自行摸索。

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