如何避免或减少重组蛋白发酵表达过程中包涵体的形成

　　重组蛋白表达过程中，包涵体的形成使后续活性蛋白的收率降低，并且包涵体的复性及纯化过程复杂，难度大。那么如何避免或减少重组蛋白发酵表达过程中包涵体的形成呢?
 

　　表达调控
 

　　包涵体的形成，主要原因是表达速率过快，过量表达导致蛋白堆积而成。那么通过降低重组蛋白的表达速率来减少或抑制包涵体的形成，可以尝试低温诱导等方式减少包涵体的形成。
 

　　优化序列
 

　　蛋白序列中含硫氨基酸增多及脯氨酸的数量增多，更容易形成包涵体，含硫氨基酸数量多，二硫键若不能正确配对极易形成包涵体，而脯氨酸是D型氨基酸，常需要异构酶辅助折叠。所以可以通过定点突变等方式来降低含硫氨基酸和脯氨酸的数量从而减少包涵体的形成。
 

　　共表达
 

　　在蛋白序列上连接一段可溶性表达的序列，来改变蛋白的氨基酸组成及各种氨基酸占的比例，也可以有效避免或减少包涵体的形成，比如加GST标签有一定的促溶作用。
 

　　环境调控
 

　　蛋白所处环境也会影响其形成包涵体，比如细胞内的环境pH接近蛋白的pI时也容易形成包涵体，还有渗透压也会影响细胞内的疏水作用力，也会对蛋白的折叠积累形成影响，那么减少或避免包涵体的形成可以尝试改变发酵过程中的pH和培养基中盐的种类及浓度，来避免或减少包涵体的形成。
 

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